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制備液相知多少

　更新時(shí)間：2021-04-15　點(diǎn)擊量：2912

色譜分析的目的：

分析色譜的目的，是分析出混合物中一個(gè)（或者幾個(gè)）純物質(zhì)的含量；制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。

為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率，制備色譜的的進(jìn)樣品量很大，導致制備色譜柱子的分離負荷的相應加大，也就必須使用加大填料的色譜柱，增大制備色譜的直徑和長(cháng)度，使用的相對多的流動(dòng)相。然而，當色譜柱上樣品負載加大的時(shí)候，往往導致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜，要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對重現性也要考慮。從經(jīng)濟上來(lái)說(shuō)。制備色譜要爭取少用填料，少用溶劑，要盡可能多的得到產(chǎn)品。

樣品的前處理：

制備色譜柱子由于處理的樣品多，比分析柱子更容易受污染，所以，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過(guò)濾、結晶、固相萃取等簡(jiǎn)單的分離方法，如果用得上，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn)：

各種規格的玻璃柱子在實(shí)驗室里頭很容易得到，而且價(jià)格低廉，但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎。當由于壓力太小而導致流動(dòng)相流速很慢的時(shí)候，高位液面或加高壓空氣（或者氮氣）的采用是一個(gè)簡(jiǎn)單的解決辦法。在底下加真空，也能在一定程度上解決這個(gè)問(wèn)題。

不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，但其價(jià)格相對很貴。如果，只有很小的分離任務(wù)且經(jīng)費也允許，選擇市面上直徑為1cm的小型制備柱。有機玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運行狀態(tài)，對有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出。

固定相的選擇：

硅膠、鍵合固定相（如C18）、離子交換樹(shù)脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻報道，對填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果，如，對硅膠進(jìn)行的硝酸銀（或緩沖液）處理。

裝柱方法的選擇：

根據固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大，顆粒度的減少會(huì )導致裝柱的難度。一般來(lái)說(shuō)，顆粒直徑小于20－30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊－裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成。然而，當柱直徑大于20mm，所加壓力為30－40bar時(shí)，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復雜。為將小顆粒固定相裝入更大的制備型色譜柱，可采用柱長(cháng)壓縮技術(shù)。這種方法，先將固定相懸漿（或偶爾是干填充物）裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設備，在柱子填完后，應用有柱效的測量，對柱效低的柱子應該重填。

流動(dòng)相的選擇：

除了和分析色譜同樣的考慮外，在選用流動(dòng)相時(shí)，要考慮色譜分離后面加有旋轉蒸發(fā)等二次分離操作。一般來(lái)說(shuō)，不宜采用高毒性溶劑，對多元溶劑要盡可能的少用。

如果產(chǎn)品中含有大量溶劑，溶劑的純度也要考慮在其中。

加樣的方法：

可以采用以下方法之一進(jìn)樣。－用注射器進(jìn)樣－用旋轉閥進(jìn)樣－通過(guò)六通閥進(jìn)樣－通過(guò)主泵進(jìn)樣－通過(guò)輔泵進(jìn)樣－固體上樣

泵的選用：

生產(chǎn)制備色譜泵的廠(chǎng)商很多。根據有無(wú)脈沖、能承受的大壓力、控制的精度、售后服務(wù)等來(lái)選擇泵。

檢測器的選用：

一般的分析池的大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。而專(zhuān)門(mén)的制備池的大允許流速可為150mL/min。有時(shí)，采用旁路分離管，將少量流體導入分析池進(jìn)行檢測，是一個(gè)不錯的辦法，但其濃度的誤差會(huì )相對較大。

組分保留時(shí)間的估計：

用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動(dòng)相）測定保留時(shí)間后，按照單一組分的線(xiàn)流速（不是體積流速）一定，通過(guò)計算可以知道組分的大致保留時(shí)間區域。分析譜圖的峰形狀，對確定保留時(shí)間也有很大的參考價(jià)值。

產(chǎn)品的收集：

手工餾分收集費時(shí)費力，自動(dòng)餾分收集器有很大的方便。許多實(shí)驗室和工廠(chǎng)都采用了餾分收集器。

超載、邊緣切割、中心切割、放大技術(shù)與非線(xiàn)性效用

在制備色譜中，因為沒(méi)有必要達到分析色譜那樣的分離度，可以在一定范圍內大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時(shí)候，也有一些分析色譜的時(shí)候，不能用到的技巧。因為篇幅關(guān)系，不在這里敘述。

柱轉換技術(shù)

通過(guò)接頭或者閥門(mén)，實(shí)現柱子的簡(jiǎn)單延長(cháng)，或者比較方便地實(shí)現對其中一個(gè)（或幾個(gè)）組分的精制。

比較新的制備色譜技術(shù)

模擬移動(dòng)床可以連續進(jìn)樣，并可以利用邊緣切割效用，而且采用了柱切換技術(shù)，能更好的利用溶劑和填料，已經(jīng)應用于工業(yè)化生產(chǎn)。其理論和技術(shù)也日益完善。

迎頭色譜、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應用。

相關(guān)產(chǎn)品

快速中低壓制備色譜儀系列

CombiFlash® NextGEN系列快色液相制備色譜儀可從制備純化過(guò)程中進(jìn)行自動(dòng)識別色譜尺寸和類(lèi)型，提高制備實(shí)驗效率，無(wú)論是在提純合成化合物、天然產(chǎn)品、肽或聚合物。直觀(guān)的PeakTrak軟件可在數秒內開(kāi)始分離。根據要純化的樣品的類(lèi)型和數量選擇正相或反相柱，允許RFID標簽載入運行參數，確認檢測器設置(UV, Vis, ELS和MS)，按下開(kāi)始，載入樣品，即可開(kāi)始自動(dòng)工作，無(wú)需人員值守。實(shí)驗進(jìn)行時(shí)隨時(shí)更改參數？當分離實(shí)驗開(kāi)始時(shí)，依然可以修改參數，包括溶劑百分比、波長(cháng)、流速和運行時(shí)間等，不需要進(jìn)行重復分離。

流量300ml和壓力300psi
允許運行750 g或高達1-2kg的色譜柱
以較高的壓力極限純化低溶解度的樣品
12"或15"智能觸摸屏
更寬動(dòng)態(tài)范圍的檢測器
改進(jìn)的基線(xiàn)校正支持使用吸收性溶劑
通過(guò)簡(jiǎn)化的用戶(hù)界面更快地處理
節省空間：頂部托盤(pán)可容納四個(gè)4L的瓶子
改進(jìn)的梯度曲線(xiàn)可減少多達50%的溶劑

EZ Prep 中壓/高壓制備色譜一體機

EZ Prep制備系統是一種雙重功能的純化設備，提供了 FLASH 閃式和 Prep HPLC 兩種色譜模式無(wú)縫切換，靈活和性能的不妥協(xié)，應對多樣化類(lèi)型樣品分離。閃式色譜，中低壓預分離后，對于要進(jìn)一步提高純度，從高壓分離得到更高分離率和純度化合物，是非常理想的選擇，滿(mǎn)足高純度要求。高壓運行HPLC大范圍高效液相色譜柱，高壓高流速減少運行時(shí)間。

中壓制備液相FLASH和HPLC高壓制備液相二合一

緊湊空間設計, 自動(dòng)從正相到反相溶劑的智能切換

FLASH中壓預純化4mg-100g
HPLC高壓精純化mg-g級，純度達99%
HPLC色譜柱大直徑50mm，填料粒徑在5um以下
二元梯度流速達200 mL/min，大耐壓: 3500 psi
UV, UV/VIS, ELSD和MS等多種檢測器可選

ACCQ Prep HP150 高壓制備型HPLC色譜系統

HP150直觀(guān)、易于使用、簡(jiǎn)單純化設計理念，用戶(hù)界面友好，消除了普通高效液相色譜系統中不必要的和復雜的參數設置。提高高效液相制備色譜性能和準確性，提高純化樣品回收率。內置餾分收集器和集成觸摸屏，緊湊設計節省空間，HP150系統技術(shù)特點(diǎn)：

流速1-150 mL/min開(kāi)發(fā)分析方法和制備方法
操作壓力可達6000 psi
UV或UV/VIS基礎上選擇ELSD和MS檢測器
一鍵生成聚焦優(yōu)化梯度
純化時(shí)間小化，良好樣本回收率

TORRENT 大型純化制備色譜儀

無(wú)人值守大規模自動(dòng)分離純化，自診斷系統確保足夠溶劑進(jìn)行純化和廢液溢出；適合各種溶劑器皿和廢液排放，智能液位技術(shù)監測溶劑供應和廢液。1 L/min流速、100 psi壓力、300g純化、多功能定制系統，滿(mǎn)足各種樣品、溶劑、餾分和廢物處理設置。大流量泵在1L/min流速即使梯度很小的情況下，可提供準確可靠的、重復性高的二元梯度。

性能：1000ml/min 的流速，可快速的分離高達600g的樣品。
安全：安全性超過(guò)了法規的要求，標準配備了流動(dòng)相系統的壓力傳感器和儀器周邊環(huán)境溶劑蒸汽傳感器，確保儀器在正常情況下運行，一旦出現異常及時(shí)給出報警并停機。
多功能性：用戶(hù)可使用或修改默認的參數，開(kāi)發(fā)自定義的分離程序，同時(shí)所有實(shí)驗參數均可在運行過(guò)程中加以更改，可實(shí)時(shí)控制實(shí)驗過(guò)程（包括點(diǎn)擊并拖動(dòng)修改梯度）。
操作簡(jiǎn)便：使用Peaklrak軟件，可以非常直觀(guān)地在屏幕中了解參數。
應用范圍：可用于工藝放大、化學(xué)研發(fā)、生產(chǎn)制造等生產(chǎn)實(shí)驗。
廣泛應用于制藥、藥物化學(xué)、天然物質(zhì)、農用化學(xué)、化妝品、香精香料等行業(yè)

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